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如何在實驗室用低溫操作臺上制備具有生物活性的大分子核酸

文章錄入: 四度制冷  閱讀量: 3406  添加時間: 2021/08/17

實驗室用低溫操作臺制備樣品是各類實驗的常用操作。低溫潔凈工作臺制備具有生物活性的大分子核酸.必須采取溫和的制備條件.避免過酸、過賊的反應環(huán)境

實驗室用低溫操作臺制備提取DNA的過程

在低溫潔凈工作臺無論從什么材料中提取DNA.都包括以下基本過程

1. 在低溫潔凈工作臺破碎細胞。

2. 在低溫潔凈工作臺上進行加人蛋白酶消化液 (含有蛋白酶K .SDSEDTA)。SDS可以破壞細胞膜和核膜,并可使DNA上結合的蛋白質與DNA分離,在不產生機械剪切力的前提下盡可能保持DNA的完整性,EDTA可以抑制Dnase的活性,蛋白酶K可以將蛋白質水解成小肽或氨基酸,蛋白酶KSDSEDTA存在的情況下仍可保持很高的酶活性。

3. RNase以去除RNA。

4. 用苯酚-氯仿抽提法等反復抽提,使DNA進入水相與蛋白質組分分開。

5. ⑤收集上清液后用乙醉沉淀DNA.最后用TE級沖液溶解DNA.可用于DNA的含量及純度的測定、PCR擴增、分子克隆操作等。


實驗室用低溫操作臺真核生物組織細胞基因組 DNA的提取

1. 苯酚-氯仿抽提法酚、氣仿是有機溶劑,能有效地使蛋白質變性。

2. 純酚的比重為1. 07,因此在與水混合時應處于下層。然而有機相和水相會難于分開,甚至當從溶質濃度較高的水相中抽提蛋白時會發(fā)生兩相顛倒的情況。

3. 若使用份:氯仿混合物抽提,由于氯仿的比重較大 (1. 47),可在很大程度上解決這個問題.促進兩相的分離。

4. 異戊醇則可減少操作過程中產生的氣泡。變性蛋白-般集中在兩相之間的界面層,而脂類則有效地分配在有機相中.核酸則被留于上層水相。

5. 該法具有操作條件比較溫和,能迅速使蛋白質變性并同時抑制核酸酶的活性,可得到具有生物活性的高聚合度的核酸等優(yōu)點。但其操作步驟較為繁瑣,去除蛋白質需要反復進行多次.費時,所得到的核酸仍有部分降解。

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在低溫操作臺、實驗室用低溫操作臺、低溫潔凈工作臺上制備具有生物活性的大分子核酸,都需要經過以上過程。四度醫(yī)療為實驗室低溫操作臺廠家,可提供低溫操作臺價格和詳細使用說明,并可根據(jù)實驗室需要進行實驗室用低溫操作臺的定制。

 


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